2012/2013
人Importin 8基因真核表達載體的構建及表達
《中華實驗外科雜誌》, 30(4): 821-823
| 作者 | 傅文學
江和 熊建軍 許曉源 郎斌 |
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| 摘要 |
目的：
克隆人Importin 8（IPO8）基因，觀察IPO8與綠色熒光蛋白（GFP）真核表達載體融合蛋白在宮頸癌細胞HeLa內的表達和定位。
方法：
以HeLa細胞總RNA為模板 進行逆轉錄－聚合酶鏈反應（RT-PCR），擴增全長IPO8編碼序列，經Hind III和Xba I雙酶切後，插入GFP質粒pEGFP-C1，構建pEGFP-IPO8重組表達載體。瞬時轉染重組質粒入HeLa細胞，熒光顯微鏡觀察pEGFP-IPO8在細胞內的表達與定位。
結果：
測序結果顯示經PCR擴增的IPO8編碼序列完全正確，酶切顯示重組質粒pEGFP-IPO8構建成功，熒光顯微鏡顯 示融合蛋白GFP-IPO8主要在細胞核內分佈。
結論：
成功克隆IPO8基因並構建真核表達載體，證實GFP-IPO8蛋白主要定位於HeLa細胞核。
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