目的:
探討RNA干擾(RNAi)抑制卵巢癌細胞表皮生長因子受體-2(HER-2)基因的表達及其細胞效應。
方法:
實驗分為以下3組:空白對照組(未經轉染的人卵巢癌SKOV-3細胞)、轉染非特異性的siRNA組及轉染特異性的siRNA組。干涉後5d加順鉑。採用半定量PCR技術(RT-PCR)和Western印跡法檢測HER-2mRNA和蛋白的表達,用流式細胞儀檢測細胞凋亡,用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測細胞對順鉑的化學敏感性的變化,分析觀察細胞生物學特性的改變。
結果:
HER-2siRNA對HER-2mRNA表達明顯抑制,作用能持續10d左右;干涉第7天後開始出現蛋白質表達的明顯減弱,轉染特異性siRNA組的蛋白質陽性表達率為(25.5±0.8)%,非特異性siRNA組為(95.7±0.8)%,空白對照組為(96.6±1.2)%,前組與後兩組比較差異有統計學意義(均P<0.001)。干涉後隨HER-2mRNA表達下降,細胞凋亡增加,第6天凋亡率最高,達(53.2±1.0)%,轉染非特異性siRNA組為(4.1±0.3)%,空白對照組為(4.1±0.3)%,差異有統計學意義(P<0.001);干涉後,轉染特異性siRNA組的細胞存活率為(58.4±0.8)%,轉染非特異性siRNA組為(68.0±0.6)%,空白對照組為(67.0±0.3)%,前組與後兩組比較差異有統計學意義(均P<0.001)。
結論:
體外合成的siRNA能有效抑制SKOV-3細胞中HER-2表達,促進細胞的凋亡,提高細胞對順鉑的敏感性,RNAi為卵巢癌的基因治療提供了一種新策略。